Javascript è attualmente disabilitato nel tuo browser.Diverse funzionalità di questo sito non funzioneranno mentre javascript è disabilitato.accesso aperto alla ricerca scientifica e medicaDalla presentazione alla prima decisione editoriale.Dall'accettazione editoriale alla pubblicazione.La suddetta percentuale di manoscritti è stata respinta negli ultimi 12 mesi.Riviste scientifiche e mediche peer-reviewed ad accesso libero.Dove Medical Press è membro dell'OAI.Ristampe in blocco per l'industria farmaceutica.Offriamo vantaggi reali ai nostri autori, inclusa l'elaborazione accelerata degli articoli.Registra i tuoi dettagli specifici e farmaci specifici di interesse e abbineremo le informazioni fornite agli articoli dal nostro ampio database e ti invieremo prontamente copie PDF via email.Torna a Diari » Progettazione, sviluppo e terapia di farmaci » Volume 16Autori Li Y, Wang ML, Zhang B, Fan XX, Tang Q, Yu X, Li LN, Fan AR, Chang HS, Zhang LZPubblicato il 28 marzo 2022 Volume 2022:16 Pagine 843—861DOI https://doi.org/10.2147/DDDT.S351421Revisione tramite revisione tra pari anonima singolaEditore che ha approvato la pubblicazione: Dr Anastasios LymperopoulosYu Li,1,* Mei-Ling Wang,1,* Bo Zhang,1 Xiao-Xu Fan,1 Qin Tang,1 Xue Yu,2 Li-Na Li,2 Ang-Ran Fan,2 Hong-Sheng Chang,1 Lan-Zhen Zhang1 1School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing, 102488, People's Republic of China;2School of Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing, 102488, People's Republic of China *Questi autori hanno contribuito in egual modo a questo lavoro Corrispondenza: Lan-Zhen Zhang;Hong-Sheng Chang, School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Northeast Corner of the Intersection of Sunshine South Street e Baiyang East Road, Fangshan District, Pechino, 102488, Repubblica popolare cinese, Tel +86 10 5391 2122, E-mail [e-mail protetta];[email protected] Contesto: ci sono prove crescenti che suggeriscono che il ginsenoside Rd (GRd) ha un effetto terapeutico sulla depressione, ma i meccanismi specifici alla base della sua attività richiedono ulteriori studi.Obiettivo: Questo studio è progettato per indagare l'effetto antidepressivo e i meccanismi sottostanti di GRd.Metodi: In questo studio, sono stati stabiliti il ​​modello murino di depressione comportamentale della disperazione e il modello di depressione del ratto da stress lieve e imprevedibile cronico (CUMS) per esplorare gli effetti di GRd sul comportamento simile alla depressione e sui suoi meccanismi sottostanti.I test comportamentali sono stati utilizzati per valutare la replicazione di modelli animali e comportamenti simili alla depressione.L'ipossia-inducibile fattore-1α (HIF-1α) bloccante 2-metossiestradiolo (2-ME) è stato iniettato per determinare il ruolo di HIF-1α nell'effetto antidepressivo di GRd.Inoltre, sono state utilizzate tecniche di biologia molecolare per determinare l'mRNA e l'espressione proteica della via di segnalazione HIF-1ɑ e dei regolatori correlati alla plasticità sinaptica, ovvero la sinapsina 1 (SYN 1) e la proteina di densità postsinaptica 95 (PSD 95).Sono stati condotti studi di interazione di legame in silico di GRd con proteine ​​bersaglio focalizzate utilizzando l'aggancio molecolare per prevedere l'affinità e la modalità di legame ottimale tra ligandi e recettori.Risultati: i nostri dati mostrano che GRd ha invertito significativamente il comportamento simile alla depressione e ha promosso l'espressione di mRNA e proteine ​​​​della via di segnalazione HIF-1ɑ e regolatori relativi alla plasticità sinaptica.Tuttavia, l'effetto antidepressivo di GRd è scomparso dopo l'inibizione dell'espressione di HIF-1α dopo la somministrazione di 2-ME.Inoltre, i risultati dell'aggancio molecolare hanno mostrato che GRd possedeva un'affinità di legame significativa per HIF-1α, VEGF e VEGFR-2.Conclusione: i nostri risultati mostrano che GRd mostra un significativo effetto antidepressivo e che la via di segnalazione HIF-1α è un obiettivo promettente per il trattamento della depressione.Parole chiave: ginsenoside Rd, effetto antidepressivo, via di segnalazione HIF-1α-VEGF, VEGFR-2, regolatori della plasticità sinaptica, docking molecolareLa depressione è un disturbo affettivo mentale caratterizzato da una diminuzione significativa e prolungata dell'interesse, umore basso, pensiero lento, declino dell'attività e perdita di appetito, che colpisce gravemente la salute fisica e mentale dei pazienti.1 Secondo un rapporto del World Health Organizzazione, si prevede che la depressione diventi la principale causa del carico globale di malattie entro il 2030.2 Al momento, la strategia di trattamento per la depressione coinvolge ancora gli inibitori selettivi della ricaptazione della serotonina (5-HT) (SSRI) che sono stati tradizionalmente utilizzati in clinica.Sfortunatamente, gli SSRI non soddisfano i criteri per una terapia eccellente, tra cui un rapido inizio d'azione, un alto tasso di cura e un minor numero di effetti collaterali.Gli SSRI sono inefficaci fino al 35% dei pazienti e causano molti effetti collaterali, come reazioni avverse gastrointestinali (in particolare nausea e vomito) ed effetti collaterali neurologici (soprattutto mal di testa e tremori).3–5 Inoltre, la depressione è diventata una grave malattia in tutto il mondo il problema della salute pubblica e i suoi complicati meccanismi patologici devono essere ulteriormente esplorati.Di conseguenza, affrontare questa esigenza insoddisfatta richiede ulteriori studi per sviluppare farmaci antidepressivi sicuri ed efficaci ed esplorare meccanismi d'azione innovativi.Il Panax ginseng Meyer, preziosa medicina tradizionale cinese, è originario dei paesi dell'Estremo Oriente (in particolare Cina e Corea).6 Secondo la Farmacopea della Repubblica popolare cinese (2020), ha l'effetto di rafforzare l'energia vitale, calmare la mente e potenziare le funzioni cognitive.Inoltre, l'antidepressivo era una delle indicazioni cliniche del ginseng secondo la medicina tradizionale cinese, con l'estratto di ginseng segnalato anche per migliorare la depressione nelle donne in postmenopausa.7,8 La ricerca moderna ha dimostrato che i ginsenosidi sono i principi attivi del ginseng, tradizionalmente usati per trattare insonnia, palpitazioni cardiache, disturbi dell'umore e depressione.9–11 Kaixin San è stato utilizzato clinicamente per la prevenzione e il trattamento della depressione e molti studi hanno dimostrato che i ginsenosidi sono molto probabilmente i suoi principali ingredienti medicinali.12,13 Nei modelli di depressione dei roditori , le saponine e i monomeri totali del ginseng, inclusi ma non limitati a, Rb1, Rg1 e Rg3 hanno mostrato una grande attività antidepressiva.14-17 Questi studi supportano l'ipotesi che i ginsenosidi possano essere promettenti farmaci antidepressivi.I ginsenosidi naturali hanno una scarsa disponibilità orale.I ricercatori generalmente ritengono che i ginsenosidi agiscano come profarmaci in farmacologia se assunti per via orale e che i loro metaboliti possano essere responsabili della loro efficacia osservata a causa della loro migliore attività farmacologica.18 Ginsenoside Rd (GRd), che è prodotto dal metabolismo del protopanaxadiolo idrofilo ginsenoside attraverso il microbiota intestinale, è uno dei componenti più attivi e abbondanti coinvolti nell'efficacia del ginseng.GRd ha una varietà di attività farmacologiche, soprattutto in termini di neuroprotezione e mostra una migliore efficacia rispetto ad altri ginsenosidi.19 I potenziali meccanismi di neuroprotezione di GRd possono essere correlati all'antinfiammatorio, antiossidante, antiapoptotico e alla regolazione del Ca2+ e del nervo fattori di modulazione della via di segnalazione NF-κB, PI3K e MAPK.20 Studi recenti hanno dimostrato che GRd potrebbe migliorare il deterioramento cognitivo causato da stress cronico e svolgere un grande effetto antidepressivo nei modelli di depressione di roditori.21,22 Tuttavia, il meccanismo di quale GRd migliori la depressione non è chiaro, richiedendo quindi ulteriori indagini.Il fattore 1 inducibile dall'ipossia (HIF-1), un eterodimero composto da HIF-1α e HIF-1β, svolge un ruolo importante nel processo delle cellule che percepiscono e si adattano ai cambiamenti della pressione parziale dell'ossigeno nell'ambiente interno.Come subunità regolatrice di HIF-1, HIF-1α regola l'attività di HIF-1 attraverso la sua sensibilità ai cambiamenti nella concentrazione di ossigeno.23 Vi sono prove crescenti che suggeriscono che HIF-1α potrebbe essere un nuovo bersaglio per il trattamento della depressione.Gli studi hanno dimostrato che l'ipossia intermittente potrebbe promuovere la neurogenesi dell'ippocampo nei ratti adulti ed esercitare effetti simili agli antidepressivi su una varietà di modelli animali per lo screening dell'attività antidepressiva, che è strettamente correlata all'attivazione di HIF-1α.24 L'attivazione di HIF-1α può mediare la plasticità sinaptica per esercitare un effetto simile a un antidepressivo, che può essere completamente bloccato quando la sintesi di HIF-1α è inibita dall'infezione lentivirale con HIF-1α a piccoli RNA a forcina.25 HIF-1α prende di mira i geni del fattore di crescita endoteliale vascolare (VEGF) e dell'eritropoietina ( EPO) hanno anche effetti simili.Il VEGF è essenziale per indurre i rapidi effetti simil-antidepressivi, le azioni neurotrofiche e gli effetti sinaptici della ketamina.La somministrazione periferica di EPO può anche produrre un forte effetto antidepressivo.Questi studi suggeriscono che HIF-1α è un promettente bersaglio terapeutico per la depressione.26,27Molti studi hanno dimostrato che GRd agisce sul percorso HIF-1α-VEGF per svolgere molteplici ruoli positivi.Questi includono la pro-angiogenesi dopo ictus ischemico e la neurogenesi dopo un'ischemia cerebrale focale transitoria.28,29 Ciò suggerisce che GRd può anche ottenere un effetto terapeutico nella depressione attraverso questa via di segnalazione.Per verificare questa ipotesi, sono stati stabiliti il ​​modello di depressione del topo della disperazione comportamentale e il modello di depressione del ratto da stress lieve e imprevedibile cronico (CUMS) per esplorare l'effetto antidepressivo e i meccanismi specifici di GRd.Inoltre, GRd è stato selezionato come ligando per l'aggancio mirato a HIF-1α, VEGF e VEGFR-2 per studi di docking molecolare per valutare il legame proteina-ligando e per convalidare ulteriormente GRd come potenziale ligando in altri bersagli per l'intervento terapeutico nella malattia.Gli esperimenti sono stati condotti su topi ICR maschi adulti (grado SPF, 18–22 g) e ratti maschi Sprague Dawley (grado SPF, 180–220 g).Tutti gli animali sono stati ottenuti da SiPeiFu (Beijing) Biotechnology Co., Ltd., numero di licenza animale: SCXK (Beijing) 2019-0010.Prima degli esperimenti veri e propri, agli animali era concessa una settimana di alimentazione adattativa.Inoltre, tutti gli animali sono stati tenuti nelle seguenti condizioni standard, incluso un ciclo luce/buio di 12/12 h (luce accesa 8:00 e luce spenta 20:00), a temperatura ambiente (21–23°C), intervallo di umidità del 30–50% e cibo e acqua standard adeguati.Tutte le fasi che coinvolgono gli animali sono state autorizzate dal Comitato sperimentale di etica animale del Comitato accademico dell'Università di medicina cinese di Pechino (codice identificativo del progetto: BUCM-2021082802-3002).Le procedure sperimentali del nostro studio sono state eseguite secondo la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.GRd e paroxetina sono stati ottenuti da Yuanye (purezza > 98%, Shanghai, Cina) e 2-metossiestradiolo (2-ME) è stato ottenuto da APE × BIO (Houston, USA).Quaranta topi sono stati divisi casualmente in quattro gruppi: controllo (Con), paroxetina (Par, 10 mg/kg, ip), GRd a basso dosaggio (L-GRd, 10 mg/kg, ig) e GRd ad alto dosaggio (H -GRd, 20 mg/kg, ig).Tutti i farmaci sono stati somministrati una volta al giorno per 14 giorni, mentre i topi nel gruppo Con hanno ricevuto un uguale volume di soluzione salina.I test comportamentali sono stati eseguiti il ​​giorno 14. Tutti i topi sono stati anestetizzati per via intraperitoneale con pentobarbital all'1%.L'ippocampo di ciascun topo è stato rimosso e conservato in ghiaccio per l'analisi.Quaranta topi sono stati divisi casualmente in quattro gruppi: controllo (Con), 2-metossiestradiolo (2-ME), GRd ad alte dosi (H-GRd) e H-GRd + 2-ME.I topi nel gruppo H-GRd sono stati trattati per via intragastrica con GRd (20 mg/kg) una volta al giorno per 14 giorni.La dose GRd utilizzata era la dose ottimale identificata in Behavioral Despair Mouse Model of Depression.I topi nel gruppo GRd+2-ME sono stati iniettati per via intraperitoneale con 2-ME (5 mg/kg) dopo somministrazione intragastrica di GRd.Il gruppo Con ha ricevuto volumi uguali di soluzione salina e i topi nel gruppo 2-ME sono stati iniettati per via intraperitoneale con 2-ME (5 mg/kg) dopo aver ricevuto soluzione salina.I test comportamentali sono stati eseguiti il ​​giorno 14.Sessanta ratti sono stati divisi casualmente in sei gruppi: controllo (Con), modello (CUMS, CUMS+salina), CUMS+Par (CUMS+4,8 mg/kg paroxetina, ip), CUMS+L-GRd (CUMS+10 mg/kg GRd, ig), CUMS+H-GRd (CUMS+20 mg/kg GRd, ig) e H-GRd (20 mg/kg GRd, ig).Tutti i ratti, ad eccezione di quelli dei gruppi Con e H-GRd, sono stati esposti a fattori di stress lievi imprevedibili per 28 giorni.Successivamente, ogni gruppo di ratti ha ricevuto il farmaco corrispondente per 21 giorni.I test comportamentali inclusi i test in campo aperto (OFT) e i test di preferenza del saccarosio (SPT) sono stati eseguiti il ​​giorno 21 della somministrazione.Tutti i ratti sono stati anestetizzati mediante iniezione intraperitoneale di pentobarbital all'1% e l'ippocampo di ciascun ratto è stato rimosso e conservato in ghiaccio per l'analisi.Ad eccezione dei gruppi Con e H-GRd, i ratti sono stati esposti a uno o due dei seguenti fattori di stress accompagnati da allevamento in gabbia singola per 28 giorni: privazione di cibo e acqua, inversione del giorno e della notte, inclinazione della gabbia, 4°C nuoto in acqua ghiacciata, rumore, stroboscopico, lettiera bagnata in gabbie, contenimento del corpo, scuotimento orizzontale e pizzicamento della coda.Lo stesso fattore di stress non è stato ripetuto entro un periodo di 7 giorni per impedire ai ratti di prevedere i fattori di stress imminenti.I topi sono stati portati nella sala prove per adattarsi per 1 ora prima delle prove di nuoto forzato (FST).Un singolo topo è stato posto in un contenitore di vetro a forma cilindrica (altezza: 25 cm, diametro: 10 cm) riempito con acqua del rubinetto (altezza dell'acqua: 10 cm, temperatura: 24±1°C).Quando i topi nuotavano, la coda e gli arti non potevano raggiungere il fondo del contenitore mentre la punta del naso era fuori dall'acqua per respirare.I contenitori sono stati separati da una piastra opaca per impedire a due topi di osservarsi a vicenda.Dopo 2 minuti di nuoto adattivo, il tempo di immobilità cumulativa del topo entro 4 minuti è stato automaticamente raccolto e analizzato dal sistema di analisi del comportamento (Etho-Vision XT9, Noldus, Paesi Bassi).Il criterio standard per determinare l'immobilità dei topi era il seguente: il topo smetteva di lottare e galleggiava sull'acqua, oppure faceva solo piccoli movimenti necessari per mantenere la testa sopra l'acqua.Gli animali sono stati portati nella sala prove per adattarsi per 1 ora prima degli OFT.I test hanno utilizzato una scatola di attività autonoma quadrata opaca (topi: 45 cm × 45 cm × 30 cm; ratti: 100 cm × 100 cm × 40 cm).Il fondo della scatola era diviso in venticinque quadrati identici con nove quadrati al centro posti come area centrale.Un singolo topo o ratto è stato posizionato al centro della casella dell'attività autonoma ed è stato utilizzato il sistema di analisi del comportamento descritto nei test di nuoto forzato per registrare la distanza di movimento, la velocità, la frequenza di ingresso al centro e la durata della permanenza al centro entro 5 min.L'ambiente è stato mantenuto silenzioso con luce stabile durante i test.Prima di ogni esperimento, l'area è stata pulita con alcol per rimuovere tutte le feci e per rimuovere qualsiasi odore lasciato dai topi precedenti.L'SPT è un metodo classico per valutare l'anedonia negli animali.In breve, i ratti sono stati collocati individualmente in gabbie dotate di due flaconi di soluzione di saccarosio all'1% (p/v) per l'addestramento all'adattamento per 24 ore.Successivamente, una delle bottiglie di soluzione di saccarosio è stata sostituita con acqua del rubinetto per 24 ore.Durante il terzo periodo di 24 ore, i ratti sono stati privati ​​di cibo e acqua.Immediatamente dopo la terza fase, i ratti hanno avuto libero accesso a due bottiglie di soluzione nella gabbia per 2 ore, una bottiglia riempita con 100 ml di soluzione di saccarosio all'1% e l'altra bottiglia contenente 100 ml di acqua di rubinetto.Le posizioni delle due bottiglie sono state alternate ogni ora per evitare preferenze posizionali.È stato registrato il consumo di entrambe le soluzioni e la preferenza per il saccarosio è stata calcolata come tasso di preferenza per il saccarosio (%): consumo di saccarosio/(consumo di saccarosio + consumo di acqua del rubinetto) × 100.Per rilevare l'espressione di mRNA di geni rilevanti, l'RNA totale è stato prima estratto dal tessuto dell'ippocampo utilizzando l'Hipure Total RNA Mini Kit (MAGEN) secondo le istruzioni del produttore.Uno spettrofotometro ultravioletto (UV-2000, Unico) è stato utilizzato per misurare la concentrazione di RNA di ciascun campione e i campioni di RNA sono stati mantenuti su ghiaccio per prevenirne la degradazione.La trascrizione inversa è stata eseguita utilizzando il kit di sintesi del cDNA RevertAid First Strand (Thermo Scientific) e il Master Mix Power SYBR Green PCR (Invitrogen) secondo le istruzioni del produttore.Le seguenti condizioni sono state utilizzate su una macchina T100 Thermal Cycler PCR (Bio-Rad, USA): 42°C per 1 ora, 70°C per 5 min, conservazione a 4°C.L'amplificazione e il rilevamento quantitativo sono stati eseguiti in una macchina Real-Time PCR (Bio-Rad, USA) utilizzando il seguente protocollo: denaturazione iniziale a 95°C per 10 minuti, denaturazione a 95°C per 10 secondi, ricottura a 60°C ed estensione per 30 secondi con un totale di 50 cicli di amplificazione.Abbiamo utilizzato il metodo 2−ΔΔCt per calcolare l'analisi quantitativa relativa dei risultati.Tutte le sequenze di primer sono mostrate nella Tabella 1.Tabella 1 Sequenze di primer utilizzate per RT-PCRTabella 1 Sequenze di primer utilizzate per RT-PCRIl tessuto dell'ippocampo è stato omogeneizzato in tampone di lisi RIPA con inibitori della proteasi e della fosfatasi utilizzando un omogeneizzatore elettrico, quindi lisato su ghiaccio per 20 minuti prima della centrifugazione a 13.000 rpm per 20 minuti a 4°C.Il surnatante è stato raccolto e il pellet è stato scartato per ottenere i lisati cellulari interi.La concentrazione proteica totale è stata determinata secondo le istruzioni di un kit di quantificazione delle proteine ​​BCA.Un totale di 40 µg di proteine ​​​​è stato separato mediante elettroforesi su un gel di sodio dodecil solfato-poliacrilammide al 5-8% e quindi trasferito su una membrana PVDF da 0,45 µm mediante trasferimento a umido a 100 V di tensione costante per 1,5 ore.Successivamente, la membrana è stata bloccata con latte in polvere scremato al 5% (p/v) a temperatura ambiente per 2 ore.Dopo 3 x 10 minuti di lavaggio in tampone TBST, la membrana è stata incubata con l'anticorpo primario a 4°C durante la notte e poi ulteriormente lavata 3 volte prima dell'incubazione con anticorpi secondari a temperatura ambiente per 1 ora.Le macchie sono state sviluppate utilizzando un kit di rilevamento della chemiluminescenza ECL.Le proteine ​​marcate sono state visualizzate utilizzando un sistema di imaging molecolare multifunzionale Azure (C600, Azure, USA).Gli anticorpi primari e i loro rapporti di diluizione erano i seguenti: anti-HIF-1α (1:1000, Abcam), anti-VEGF (1:3000, Proteintech), anti-VEGFR-2 (1:800, Proteintech), anti- t-PI3K (1:10.000, Proteintech), anti-p-PI3K (1:500, Abcam), anti-t-Akt (1:5000, Proteintech), anti-p-AKT (1:5000, Proteintech), anti-t-mTOR (1:25.000, Proteintech), anti-p-mTOR (1:1000, Cell Signaling Technology), anti-SYN 1 (1:6000, Proteintech), anti-PSD 95 (1:3000, Proteintech ) e anti-α-Tubulina (1:5000, Proteintech).Gli anticorpi secondari e i loro rapporti di diluizione erano i seguenti: IgG anti-coniglio di capra affinipure coniugata con HRP (1:5000, Proteintech) o IgG anti-topo di capra affinipure coniugata con HRP (1:5000, Proteintech).Strutture tridimensionali (3D) di proteine ​​bersaglio focalizzate tra cui HIF-1α, VEGF e VEGFR-2 implicate nella depressione sono state ottenute dalla banca dati proteica online RCSB (PDB; https://www.rcsb.org/).PyMOL 2.4 (Delano Scientific LLC, Italia) è stato utilizzato per rimuovere molecole d'acqua e ligandi di piccole molecole dalla struttura delle proteine.AutoDock Tools è stato quindi utilizzato per aggiungere idrogeno e tipi di atomi, per calcolare la carica e infine per la conversione nel formato PDBQ.Una struttura bidimensionale (2D) del ligando della piccola molecola (cioè GRd) è stata ottenuta dal database PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/).Il software Chem3D 19.0 è stato quindi utilizzato per convertirlo in una struttura 3D e per ottimizzare la struttura meccanica per ridurre al minimo l'energia.AutoDock Tools è stato utilizzato per rilevare la radice del ligando e selezionare il legame ruotabile.Infine, questo è stato salvato in un formato PDBQT.Gli esperimenti di docking molecolare sono stati eseguiti in Autodock Vina (PyRx 0,8).I dati sono espressi come media ± media dell'errore standard (SEM) e i dati con distribuzione normale e omogeneità della varianza sono stati analizzati utilizzando l'analisi della varianza unidirezionale (ANOVA) seguita dal test di confronto multiplo di Dunnett.Il test di Kruskal-Wallis è stato utilizzato per i dati con distribuzione non normale.L'analisi statistica è stata eseguita utilizzando SPSS 26 (SPSS, Chicago, Illinois, USA) e GraphPad Prism 8.0 (GraphPad Software Inc, San Diego, CA, USA).Un valore p < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.L'FST è ancora uno dei metodi più comunemente usati per lo screening degli antidepressivi in ​​tutti i modelli animali.Rispetto al gruppo Con, il tempo di immobilità del nuoto forzato dei gruppi H-GRd, D-GRd e Par era significativamente più breve (* p < 0, 05; ** p < 0, 01) (Figura 1).Figura 1 Gli effetti di GRd sul tempo di immobilità nel FST.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).*p < 0,05 rispetto al gruppo di controllo;**p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.Figura 1 Gli effetti di GRd sul tempo di immobilità nel FST.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).*p < 0,05 rispetto al gruppo di controllo;**p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.Gli OFT sono stati progettati per eliminare l'interferenza del tempo immobile nell'FST.Non ci sono state differenze significative in termini di distanza di movimento, velocità, frequenza di ingresso al centro e durata della permanenza al centro tra tutti i gruppi (Figura 2).Figura 2 Gli effetti di GRd sull'OFT.(A) La distanza di movimento.(B) La velocità di movimento.(C) La frequenza di ingresso nel centro.(D) La durata del soggiorno nel centro.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).I risultati non hanno mostrato differenze tra i diversi gruppi.Figura 2 Gli effetti di GRd sull'OFT.(A) La distanza di movimento.(B) La velocità di movimento.(C) La frequenza di ingresso nel centro.(D) La durata del soggiorno nel centro.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).I risultati non hanno mostrato differenze tra i diversi gruppi.I cambiamenti nella via di segnalazione HIF-1α-VEGF sono stati esaminati nel modello murino di depressione della disperazione comportamentale per esplorare i potenziali meccanismi alla base dell'effetto antidepressivo di GRd.Abbiamo scoperto che l'espressione di mRNA e proteine ​​di HIF-1α e VEGF nei gruppi di GRd a dose bassa e alta erano significativamente superiori a quelli del gruppo di controllo (Figura 3; * p < 0, 05; ** p < 0, 01; *** p < 0,001).Figura 3 Gli effetti di GRd sulla via di segnalazione HIF-1α-VEGF.(A) Espressione di mRNA di HIF-1α.(B) Espressione di mRNA di VEGF.(C) Espressione della proteina HIF-1α.(D) Espressione della proteina VEGF.(E) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).*p < 0,05 rispetto al gruppo di controllo;**p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo;***p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.Figura 3 Gli effetti di GRd sulla via di segnalazione HIF-1α-VEGF.(A) Espressione di mRNA di HIF-1α.(B) Espressione di mRNA di VEGF.(C) Espressione della proteina HIF-1α.(D) Espressione della proteina VEGF.(E) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).*p < 0,05 rispetto al gruppo di controllo;**p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo;***p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.Abbiamo usato 2-ME, un inibitore ampiamente utilizzato ed efficace di HIF-1α, per bloccare l'espressione di HIF-1α per esplorare il suo ruolo nell'effetto antidepressivo di GRd.I nostri dati mostrano che il tempo di immobilità del nuoto forzato del gruppo GRd era significativamente più breve di quello del gruppo di controllo (Figura 4; **p <0,01).Questo non era il caso dei topi del gruppo GRd+2-ME.Questi dati suggeriscono che (1) l'effetto antidepressivo di GRd può essere eliminato da 2-ME e (2) HIF-1α è essenziale per questo effetto.Inoltre, il tempo di immobilità del nuoto forzato dei topi trattati con 2-ME da solo non era diverso da quello del gruppo di controllo, che escludeva il potenziale di interferenza mediata da 2-ME.Figura 4 Gli effetti di 2-ME sul tempo di immobilità nella FST.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).**p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.Figura 4 Gli effetti di 2-ME sul tempo di immobilità nella FST.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).**p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.Non ci sono state differenze significative in termini di distanza di movimento, velocità, frequenza di ingresso al centro e durata della permanenza al centro tra tutti i gruppi (Figura 5).Figura 5 Gli effetti di 2-ME sull'OFT.(A) La distanza di movimento.(B) La velocità di movimento.(C) La frequenza di ingresso nel centro.(D) La durata del soggiorno nel centro.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).I risultati non hanno mostrato differenze tra i diversi gruppi.Figura 5 Gli effetti di 2-ME sull'OFT.(A) La distanza di movimento.(B) La velocità di movimento.(C) La frequenza di ingresso nel centro.(D) La durata del soggiorno nel centro.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).I risultati non hanno mostrato differenze tra i diversi gruppi.L'SPT è un classico test per l'anedonia negli animali.La preferenza per il saccarosio dei ratti nel gruppo CUMS era significativamente inferiore a quella del gruppo di controllo (Figura 6; ###p <0,001).In confronto, la preferenza del saccarosio dei ratti dopo il trattamento con dosi basse e alte di GRd era significativamente più alta rispetto al gruppo CUMS (Figura 6; *p <0,05, **p <0,01).Non ci sono state differenze nella preferenza del saccarosio tra i gruppi GRd e paroxetina.Questi risultati indicano che GRd può invertire l'anedonia indotta da CUMS nei ratti.Figura 6 Gli effetti di GRd sui test di preferenza del saccarosio.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.Figura 6 Gli effetti di GRd sui test di preferenza del saccarosio.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.L'OFT è anche un classico test comportamentale.La distanza di movimento, la velocità, la frequenza di ingresso nel centro e la durata della permanenza al centro del gruppo CUMS erano tutti inferiori rispetto al gruppo di controllo (Figura 7; ##p < 0,01; ###p < 0,001).Tuttavia, gli indici di osservazione degli OFT nel gruppo di trattamento GRd erano migliori rispetto al gruppo CUMS (Figura 7; *p <0,05; **p <0,01; ***p <0,001).Figura 7 Gli effetti di GRd sui test in campo aperto.(A) La distanza di movimento.(B) La velocità di movimento.(C) La frequenza di ingresso nel centro.(D) La durata del soggiorno nel centro.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).##p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.Figura 7 Gli effetti di GRd sui test in campo aperto.(A) La distanza di movimento.(B) La velocità di movimento.(C) La frequenza di ingresso nel centro.(D) La durata del soggiorno nel centro.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 10/gruppo).##p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.I dati SPT e OFT hanno mostrato che il modello CUMS è stato replicato con successo e che GRd inverte il comportamento depressivo indotto da CUMS per mostrare un significativo effetto antidepressivo.RT-PCR e Western blotting sono stati utilizzati per misurare l'espressione di mRNA e proteine ​​di HIF-1α e VEGF, rispettivamente.I dati mostrano che l'espressione di mRNA e proteine ​​di HIF-1α e VEGF nel gruppo CUMS era significativamente sottoregolata rispetto al gruppo di controllo (Figura 8; #p <0,05; ###p <0,001).Sia il GRd a basso che l'alto dosaggio hanno aumentato significativamente l'espressione dell'mRNA di HIF-1α e VEGF e l'espressione della proteina HIF-1α nei ratti CUMS (Figura 8; **p <0,01; ***p <0,001).Inoltre, GRd ad alte dosi ha aumentato significativamente l'espressione della proteina VEGF nei ratti CUMS (Figura 8; **p <0,01).Figura 8 Gli effetti di GRd sulla via di segnalazione HIF-1α-VEGF.(A) Espressione di mRNA di HIF-1α.(B) Espressione di mRNA di VEGF.(C) Espressione della proteina HIF-1α.(D) Espressione della proteina VEGF.(E) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).#p < 0,05 rispetto al gruppo di controllo.###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.Figura 8 Gli effetti di GRd sulla via di segnalazione HIF-1α-VEGF.(A) Espressione di mRNA di HIF-1α.(B) Espressione di mRNA di VEGF.(C) Espressione della proteina HIF-1α.(D) Espressione della proteina VEGF.(E) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).#p < 0,05 rispetto al gruppo di controllo.###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.Il VEGFR-2, un recettore ad alta affinità del VEGF, è implicato nella depressione.Abbiamo misurato l'mRNA e l'espressione proteica di VEGFR-2 per capire se GRd può agire sul VEGFR-2 per esercitare i suoi effetti antidepressivi.I dati hanno mostrato che l'mRNA dell'ippocampo e l'espressione proteica di VEGFR-2 nel gruppo CUMS erano gravemente sottoregolati rispetto al gruppo di controllo (Figura 9; ##p <0,01).Dopo il trattamento con GRd a basso dosaggio, l'espressione della proteina VEGFR-2 è aumentata in modo significativo (Figura 9; *** p <0, 001).Inoltre, il trattamento con GRd ad alte dosi ha aumentato significativamente i livelli di mRNA e proteine ​​di VEGFR-2 (Figura 9; * p < 0, 05; *** p < 0, 001).Questi dati confermano il coinvolgimento del VEGFR-2 nell'effetto antidepressivo di GRd.Figura 9 Gli effetti di GRd sull'mRNA e sull'espressione proteica del VEGFR-2.(A) Espressione di mRNA di VEGFR-2.(B) Espressione della proteina VEGFR-2.(C) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).##p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.Figura 9 Gli effetti di GRd sull'mRNA e sull'espressione proteica del VEGFR-2.(A) Espressione di mRNA di VEGFR-2.(B) Espressione della proteina VEGFR-2.(C) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).##p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.Abbiamo usato RT-PCR e Western blotting per esplorare i cambiamenti mediati da VEGF e VEGFR-2 nell'espressione di mRNA e proteine ​​nella via di segnalazione PI3K/AKT/mTOR, rispettivamente.I nostri dati hanno mostrato che l'espressione dell'mRNA di PI3K, AKT e mTOR e l'espressione proteica di p-PI3K, p-AKT e p-mTOR nell'ippocampo dei ratti modello CUMS erano significativamente inferiori rispetto al gruppo di controllo (Figura 10 ; #p < 0,05; ##p < 0,01; ###p < 0,001).Inoltre, GRd a basse dosi ha aumentato significativamente l'espressione dell'mRNA dell'espressione della proteina AKT e p-PI3K, p-AKT e p-mTOR nell'ippocampo dei ratti CUMS (Figura 10; * p < 0, 05; ** p < 0, 01; ** *p < 0,001).GRd ad alte dosi ha aumentato significativamente l'espressione dell'mRNA di PI3K, AKT e mTOR, sovraregolando anche l'espressione della proteina p-PI3K, p-AKT e p-mTOR (Figura 10; *p <0,05; **p <0,01; *** p < 0,001).Qui, confermiamo il coinvolgimento della via di segnalazione PI3K/AKT/mTOR negli effetti simil-antidepressivi indotti da GRd.Figura 10 Gli effetti di GRd sulla via di segnalazione PI3K/AKT/mTOR.(A) Espressione dell'mRNA di PI3K.(B) Espressione di mRNA di AKT.(C) espressione di mRNA di mTOR.(D) Espressione della proteina p-PI3K.(E) Espressione della proteina p-AKT.(F) Espressione della proteina p-mTOR.(G) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).#p < 0,05 rispetto al gruppo di controllo.##p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.Figura 10 Gli effetti di GRd sulla via di segnalazione PI3K/AKT/mTOR.(A) Espressione dell'mRNA di PI3K.(B) Espressione di mRNA di AKT.(C) espressione di mRNA di mTOR.(D) Espressione della proteina p-PI3K.(E) Espressione della proteina p-AKT.(F) Espressione della proteina p-mTOR.(G) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).#p < 0,05 rispetto al gruppo di controllo.##p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.Abbiamo anche cercato di capire se GRd esercita un effetto antidepressivo regolando i regolatori relativi alla plasticità sinaptica (cioè SYN 1, PSD 95).Abbiamo scoperto che rispetto al gruppo di controllo, l'espressione della proteina SYN 1 e PSD 95 era significativamente ridotta (Figura 11; ##p <0,01; ###p <0,01).Questo potrebbe essere invertito da GRd a basse e alte dosi (Figura 11; *p <0,05; **p <0,01; ***p <0,001).Questi dati suggeriscono che GRd può esercitare i suoi effetti simil-antidepressivi regolando l'espressione di fattori regolatori correlati alle sinapsi.Figura 11 Effetti di GRd sui regolatori della plasticità sinaptica.(A) Espressione della proteina SYN 1.(B) Espressione proteica PSD 95.(C) Le bande Western blot.I dati sono espressi come media ± SEM (n = 6/gruppo).##p < 0,01 rispetto al gruppo di controllo.###p < 0,001 rispetto al gruppo di controllo.*p < 0,05 rispetto al gruppo CUMS;**p < 0,01 rispetto al gruppo CUMS.***p < 0,001 rispetto al gruppo CUMS.Figura 11 Effetti di GRd sui regolatori della plasticità sinaptica.(A) Espressione della proteina SYN 1.(B) Espressione proteica PSD 95.mTOR, bersaglio della rapamicina nei mammiferi;VEGF, fattore di crescita dell'endotelio vascolare;e accetta di essere responsabile di tutti gli aspetti del lavoro.Gli autori non segnalano conflitti di interesse in questo lavoro.2. Organizzazione Mondiale della Sanità.Droghe.Farmacopsichiatria.J Coreano Med Sci.J Etnofarmaco.Farmaco Biochimica ComportamentoCell Physiol Biochimica.J Etnofarmaco.Psichiatria Prog Neuropsychopharmacol Biol.Oxid Med Cell Longev.J Diabete Ris.Fitomedicina.Scienziato della vitaNutrienti.J Appl Physiol.J Neurosci.J Biol Chem.Am J Psichiatria.Neurochimica Ris.Acta Pharmacol Sin.J Etnofarmaco.Molecole.Psicofarmacologia.Int J Mol Sci.Neuroscienza.Neuroterapici.Ipotesi Mediche.Eur J Neurosci.Adv Exp Med Biol.Psichiatria biologica.Traduci Psichiatria.Eur J Neurosci.Ris. PsichiatriaCellule.Neurosci Lett.Comportamento Brain Res.Drug Des Devel Ther.Int J Neuropsychopharmacol.Mol Nutr Food Res.Farmacother biomedico.J Cell Biol.Mol Neurobiol.Neuroscienza.Biotecnologie Appl Biochimica.Neurosci Lett.Psichiatria Prog Neuropsychopharmacol Biol.Funzione alimentare.Plastica neurale.Neuroscienza.PLoS uno.Exp Ther Med.Mol Neurosci anteriore.Mol Neurobiol.Farmaco Biochimica ComportamentoJ Etnofarmaco.Mol Neurobiol.Int J Mol Sci.PLoS uno.Questo lavoro è pubblicato e concesso in licenza da Dove Medical Press Limited.I termini completi di questa licenza sono disponibili su https://www.dovepress.com/terms.php e incorporano la licenza Creative Commons Attribution - Non Commercial (unported, v3.0).Accedendo all'opera accetti i Termini.Gli usi non commerciali dell'opera sono consentiti senza ulteriore autorizzazione da parte di Dove Medical Press Limited, a condizione che l'opera sia adeguatamente attribuita.Per l'autorizzazione all'uso commerciale di quest'opera, consultare i paragrafi 4.2 e 5 dei nostri Termini.Contattaci • Informativa sulla privacy • Associazioni e partner • Testimonianze • Termini e condizioni • Segnala questo sito • TopContattaci • Informativa sulla privacy© Copyright 2022 • Dove Press Ltd • sviluppo software di maffey.com • Web Design di AdhesionLe opinioni espresse in tutti gli articoli qui pubblicati sono quelle degli autori specifici e non riflettono necessariamente le opinioni di Dove Medical Press Ltd o dei suoi dipendenti.Dove Medical Press fa parte di Taylor & Francis Group, la divisione Academic Publishing di Informa PLC Copyright 2017 Informa PLC.Tutti i diritti riservati.Questo sito è di proprietà e gestito da Informa PLC ("Informa") la cui sede legale è 5 Howick Place, London SW1P 1WG.Registrato in Inghilterra e Galles.Numero 3099067. Gruppo IVA nel Regno Unito: GB 365 4626 36Al fine di fornire ai visitatori del nostro sito Web e agli utenti registrati un servizio su misura per le loro preferenze individuali, utilizziamo i cookie per analizzare il traffico dei visitatori e personalizzare i contenuti.Puoi conoscere il nostro utilizzo dei cookie leggendo la nostra Informativa sulla privacy.Conserviamo anche i dati relativi ai nostri visitatori e utenti registrati per scopi interni e per condividere informazioni con i nostri partner commerciali.Puoi conoscere quali tuoi dati conserviamo, come vengono elaborati, con chi vengono condivisi e il tuo diritto alla cancellazione dei tuoi dati leggendo la nostra Informativa sulla privacy.Se accetti il ​​nostro utilizzo dei cookie e il contenuto della nostra Informativa sulla privacy, fai clic su "accetta".